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84農(nóng)業(yè)網(wǎng) 時(shí)間：2018-03-15 作者：佚名 來(lái)源：網(wǎng)絡(luò)整理
為了提高中國(guó)林蛙南方養(yǎng)殖的繁殖成活率和雌性個(gè)體的比例，在不違背中國(guó)林蛙繁殖規(guī)律的前提下，常用人工催產(chǎn)和人工授精方法按生產(chǎn)計(jì)劃要求人為控制中國(guó)林蛙的產(chǎn)卵時(shí)間。人工催產(chǎn)技術(shù)和人工授精技術(shù)也是治療中國(guó)林蛙難產(chǎn)的有效手段。中國(guó)林蛙人工催產(chǎn)、授精過(guò)程如圖19。
1.人工催產(chǎn)
人工催產(chǎn)就是通過(guò)給卵已經(jīng)發(fā)育成熟的雌性中國(guó)林蛙注射腦垂體提取液、絨毛膜促性腺激素或促黃體激素釋放激素類似物，使雌性中國(guó)林蛙按人為設(shè)計(jì)的時(shí)間產(chǎn)卵。
（1）雌性中國(guó)林蛙的選擇：要選擇體內(nèi)卵子已經(jīng)成熟的雌蛙，最好選擇3年生雌蛙。成熟的卵粒比較大，動(dòng)物極和植物極開(kāi)始分化，動(dòng)物極黑色，約占2/3，植物極為灰白色或白色。未成熟的卵，卵粒較小，兩個(gè)半球黑白不分明。可將蛙腹側(cè)皮膚剪開(kāi)一個(gè)小口，觀察蛙卵是否成熟。
（2）腦垂體提取液的制備
①腦垂體的摘取與保存：用剪刀剪開(kāi)蛙的兩側(cè)口角，從口角后緣將蛙頭剪下，蛙頭剪斷處露出一個(gè)骨孔，稱之為枕骨大孔；把蛙頭的腹面翻轉(zhuǎn)向上，將剪刀下半部的尖端伸入枕骨大孔，斜向眼球，左右各剪一刀，用鑷子翻起剪開(kāi)的副蝶骨片，即可見(jiàn)到腦腹面的視神經(jīng)交叉后面有一堆白色的東西，其中有一粒粉紅色、約半粒芝麻大的顆粒，這就是腦垂體。尋找腦垂體時(shí)要注意，腦垂體有時(shí)會(huì)黏附在翻起來(lái)的骨片上。用鑷子小心取下整個(gè)腦垂體，取下的腦垂體要馬上使用，也可放在冰箱中短期保存（溫度保持在4℃左右可保存1個(gè)月），若存放于丙酮中，可保存1年以上。
②腦垂體的用量：通常催產(chǎn)1只中國(guó)林蛙，需用蛙（蟾蜍、青蛙等各種蛙均可）的腦垂體8個(gè)。雄蛙的腦垂體效力比雌蛙差。腦垂體的具體用量要根據(jù)中國(guó)林蛙的個(gè)體大小、性別及水溫高低等具體情況靈活掌握。如被催產(chǎn)的雌蛙個(gè)體較大，催產(chǎn)時(shí)水溫較低，所用的垂體取自雄蛙，要希望它盡快產(chǎn)卵，則腦垂體的用量應(yīng)多些；反之，則應(yīng)少些。據(jù)觀察，在水溫20℃的條件下，50克雌性中國(guó)林蛙用8只蛙的腦垂體催產(chǎn)，經(jīng)6～10小時(shí)即可產(chǎn)卵。
③提取液的制備：取出所需數(shù)量的蛙腦垂體，放入盛有1～1.5毫升0.7%生理鹽水的玻璃皿中。取注射器套上大號(hào)針頭將腦垂體和水吸入注射器中，然后換上中號(hào)針頭，把注射器內(nèi)的水和腦垂體擠出，即可使腦垂體破碎；再把腦垂體碎片和水吸入，換上口徑更小的針頭，然后再擠出，如此反復(fù)多次，就制成了腦垂體混懸液，可供注射之用。這種方法制備腦垂體混懸液比較簡(jiǎn)便，如果用量大，也可用組織勻漿器研磨制備腦垂體提取液。
也可以用促黃體生成激素釋放激素類似物代替腦垂體提取液，一般用0.7%生理鹽水配制，每只雌性中國(guó)林蛙的用量為14微克左右，雄性中國(guó)林蛙的用量為7微克左右。
（3）注射：用注射器吸取腦垂體混懸液或促黃體生成素釋放激素類似物藥液，先排掉氣泡，然后進(jìn)行皮下注射或腹腔注射。腹腔注射時(shí)，不要刺得太深，以免刺傷內(nèi)臟，最好是針頭從大腿腹面的肌肉刺入，再伸向腹腔，這樣一般不會(huì)刺傷內(nèi)臟。同時(shí)，針尖拔出后，藥液也不致從注射孔倒流出體外。注射完畢，把蛙放在一個(gè)玻璃缸或其他容器里，加入少量清水，缸口罩以紗布，放置于僻靜處。半小時(shí)后，若蛙體皮膚顏色變黑，即表明催產(chǎn)有效果。根據(jù)催產(chǎn)時(shí)的水溫和腦垂體的用量，可估計(jì)其產(chǎn)卵的大概時(shí)間。待卵子全部進(jìn)入子宮后，輕輕擠壓雌蛙腹部?jī)蓚?cè)，卵會(huì)流出，也可以讓其自行產(chǎn)出。產(chǎn)出的卵可取之進(jìn)行人工授精。若將雄性和雌性的中國(guó)林蛙放在一起，則會(huì)自然抱對(duì)受精。
2.人工授精
首先要準(zhǔn)備好精液。取一只性成熟的雄蛙，剖開(kāi)腹腔，取出睪丸，放于培養(yǎng)皿中，加入5毫升左右干凈的池水或井水（忌用新鮮的自來(lái)水或沾有油污的水），用鑷子將睪丸夾碎，精子就從睪丸游至水中，制成精子混懸液。靜置幾分鐘，等精子充分活躍起來(lái)，將蛙卵擠入培養(yǎng)皿，并輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使卵一一散開(kāi)，以利于受精。蛙卵剛受精時(shí)，有些是動(dòng)物極向上，有些是植物極向上，有些是側(cè)面向上，沒(méi)有一定規(guī)律。在水溫20℃時(shí)，授精后10分鐘左右，絕大多數(shù)卵子的動(dòng)物極翻轉(zhuǎn)向上，培養(yǎng)皿中水面呈現(xiàn)一片黑色，這種現(xiàn)象稱為卵翻轉(zhuǎn)正位，簡(jiǎn)稱卵翻正。卵翻正與否，可作為是否受精的標(biāo)志。卵翻正后，應(yīng)傾去精液，換入新鮮清水，以提供充足的氧氣，滿足受精卵進(jìn)一步發(fā)育的需要。此后，每天都要換水1～2次，直到孵化成小蝌蚪。
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